Dans la synthèse typique d'ADN, d'ARN et d'acides nucléiques non naturels, l'étape de déprotection et de couplage joue un rôle crucial.
L'étape de déprotection consiste à éliminer le groupe DMT sur le support solide ou le groupe hydroxyle 5' sur le nucléoside précédent avec un acide organique, et à exposer le groupe hydroxyle pour l'étape de couplage suivante.L'acide trichloroacétique à 3% dans le dichlorométhane ou le toluène est le plus souvent utilisé pour réaliser l'étape de déprotection.La concentration en acide trichloroacétique et le temps de déprotection (temps de déblocage) dominent la pureté des produits finaux.Une faible concentration et un temps de déblocage insuffisant laissent le groupe DMT n'ayant pas réagi, ce qui diminue le rendement et augmente les impuretés indésirables.Le long temps de déblocage peut entraîner la dépurine des séquences synthétisées, formant des impuretés inattendues.
L'étape de couplage est sensible à la teneur en eau des solvants et à l'humidité de l'air.La concentration en eau dans la synthèse doit être inférieure à 40 ppm, mieux inférieure à 25 ppm.Pour maintenir la condition de synthèse anhydre, la synthèse des acides nucléiques doit être effectuée dans un environnement à faible humidité, nous recommandons donc à nos clients d'utiliser leÉquipement dissous d'amidites, qui peut dissoudre le phosphoramidite en poudre ou huileux dans de l'acétonitrile anhydre pour éviter tout contact avec l'air.
Étant donné que la dissolution des phosphoramidites est meilleure dans la situation sans eau et que les pièges moléculaires adsorbent les traces d'eau dans les réactifs et l'amidite, il est nécessaire de préparer lePièges moléculaires.Nous recommandons un sous-tamis de 2 g pour les flacons de réactifs de 50 à 250 ml, 5 g pour les flacons de réactifs de 250 à 500 ml, 10 g pour les flacons de réactifs de 500 à 1 000 ml et 20 g pour les flacons de réactifs de 1 000 à 2 000 ml.
La dissolution des phosphoramidites doit être effectuée sous atmosphère inerte et le remplacement des réactifs activateurs et de l'acétonitrile doit être terminé à temps.Les réactifs de coiffage et d'oxydation doivent être utilisés dès que possible, les réactifs ouverts donnent moins de durée de conservation et moins d'activité pendant la synthèse.
Heure de publication : 09 août 2022