La synthèse chimique de l'ADN est basée sur la stratégie de synthèse en phase solide et la chimie des phosphoramidites.Différent de la synthèse biologique de l'ADN, le matériau de la synthèse chimique de l'ADN est le DMT (4, 4-diméthoxytrityl) et le désoxyriboxyside modifié par le phosphoramidite, comme le montre la figure 1. La synthèse de l'ADN est effectuée sur le support solide (nous pouvons proposer différents types deColonne de synthèse d'oligo), c'est-à-dire CPG (verre à pores contrôlés) et PS (polystyrène), et toute la synthèse est réalisée sur unSynthétiseur ADN/ARN, qui est notre équipement principal, a différents modèles tels que : synthétiseur à canal unique HY, HY-12, HY-192 et etc., la direction de synthèse est de 3' à 5', et un nucléotide est introduit dans le support solide via un cycle de synthèse.Un cycle de synthèse comprend généralement quatre étapes : déprotection, couplage, coiffage et oxydation (Figure 2).La déprotection est réglée pour éliminer le groupe DMT sur le support solide ou le groupe hydroxyle 5' sur le nucléoside précédent, l'acide trichloroacétique à 3 % dans le dichlorométhane est utilisé comme réactif de déprotection.Ensuite, le désoxyriboxyside modifié par le phosphoramidite a été exposé au groupe hydroxyle à l'aide d'un activateur, à savoir le 5-éthylthiotétrazole ou le 4, 5-dicyanoimidazole, formant le phosphitétriester (III), et a réalisé l'étape de couplage.Une étape de coiffage est effectuée pour bloquer le groupe hydroxyle n'ayant pas réagi pendant l'étape de couplage, afin de minimiser la formation de séquences de défauts indésirables.Enfin, le phosphitétriester instable (III) est oxydé en phosphortriester chimiquement stable (V) avec de l'iode comme oxydant en présence de pyridine.
L'ADN synthétisé peut être clivé du support solide par aminolyse, le groupe protégé 2-cyanoéthyle sur le phosphortriester et l'amide sur la nucléobase sont clivés en même temps, les plaques de synthèse et les colonnes de synthèse dans les racks sont placées directement dans la chambre de réaction. de laÉquipement de déprotection.L'ADN brut peut être préparé par HPLC, électrophorèse et OPC sur demande, nous pouvons également vous fournir leÉquipement de purificationpour le post-traitement.
Figure 1. La structure chimique de dABzphosphoramidite.
Figure 2. Le mécanisme de synthèse chimique de l’ADN.
Heure de publication : 09 août 2022